Architecture for multi-technology real-time location systems

[Abstract] Indoor localization is a problem that has generated much interest in recent years. Proximity marketing, eHealth, smart-parking and smart-cities, security and emergency units, logistics management, or industrial control systems are some pf the sectors that have demanded new Location Based Services (LBSs). These services are usually implemented using Wireless Sensor Networks (WSNs), capable of transmitting and receiving Radio Frequency (RF) signals in order to locate mobile devices attached to vehicles, people, or animals. While systems based on satellite systems such as GPS work correctly in outdoor scenarios, indoor localization is still a challenging field of study. On one hand, signal propagation problems are common, not only due to reflections and scattering due to the building structures, but also because of signal attenuation and fading caused mainly by people in movement. To overcome these issues, most of the approaches use several WSNs with a combination of multiple wireless technologies, such asWiFi, ZigBee or Bluetooth, some of them also available in mobile devices such as smartphones and tablets. On the other hand, data received from multiple devices must be filtered and combined by means of location algorithms and techniques in order to obtain precise and robust Real-Time Location Systems (RTLSs). Therefore, it is common to implement hybrid location systems with support for several technologies at the same time. Nevertheless, the development of such systems entails a huge complexity. Thus, one of most widely accepted alternatives is the implementation of software architectures for localization, which provide several benefits. First, accessing to different kinds of hardware devices entails fewer platform and technology restrictions. Second, some common tasks are easier to perform, such as sensor data gathering and storage. Finally, architectures provide utilities for adding and retrieving localization data, user management, or the possibility of using several mapping and coordinate systems. In this work, we present several solutions for implementing software architectures for localization. First, we propose a mono-technology architecture using only Received Signal Strength (RSS) signal levels for ranging, which evolves into a much more complete multitechnology architecture in a second stage. The proposed approaches implement several functionalities that resolve most of the hybrid RTLS system requirements, such as: • Multi-technology. • Support for several coordinate systems and mapping applications. • Data fusion. • Protection and security for both data and user access. • Standardized API for remote access. • Support for off-line data queries, not only on-line data and in real-time. • Depending on different user roles, it eases their tasks at different access levels: registration of WSNs, building blueprints, anchor and mobile node networks registration, generic sensor support, addition and retrieval of measurements and raw sensor data, multiple query support for filtered position estimations, etc. Moreover, we also contributed with different WSN physical layer implementations and experiments. And, due to collaborations with other research groups at different universities we have contributed with a customized hardware and software solution for localization based on RFID technology, as well as with the design of new antenna models based on linear-arrays of Electromagnetically Coupled Patchs (ECPs), valid for improving the WSN communication performance.[Resumo]O problema da localización no interior de edificios foi adquirindo cada vez máis importancia nos últimos anos debido á enorme demanda de novos servizos baseados en localización (LBSs). que apareeeron en todo tipo de sectores como eHealth. marketing por proximidade. smartparking e smart--cities. seguridade e emerxencias. loxística ou control industrial, entre outros. Estes sistemas habitualmente estan baseados na implementación de redes de sensores sen fíos (WSN) capaces de transmitir ou recibir sinais de radio (RF) para localizar dispositivos móbiles. xeralmente adheridos a vehículos. persoas ou animais. Menlres que en exteriores os sistemas de satélites baseados en tecnoloxías corno GPS funcionan correctamente na maioría de entornos. a localización en interiores non é unha tarefa sinxela de resolver e afnda inelúe múltiples retos. Principalmente aparecen problemas de propagación debido ás reflexións e rebotes dos sinais nas estruturas dos edificios. pero tarDén debido a atenuaci6ns e apantallamentos ocasionados xeralrnente por xente en movemento. Para resolver estes problemac;; é necesario implementar ac;; redes de sensores utilizando unha ou varias tecnoloxías sen fíos (como WiFi. ZigBee ou Bluetooth). a1gunhas delas disponibles en terminais sen fíos como smartphones ou tablets. Pero. por outra parte. tamén é necesario o uso de múltiples algoritmos e técnicas de localización para filtrar e posiblemente combinar os datos destas tecnoloxías. permitindo obter así sistemas de localización en tempo real (RTLS) robustos e coa maior precisión posible. Deste xeito. a aproximación máis usual na actualidade para resolver estos problemas é a implementación de sistemas de localización híbridos que soporten múltiples tecnoloxías simultaneamente. Nembargantes. O desenvolvemento destes sistemas leva implícito unha gran complexidade. Unha das alternativas comunmente aceptada é a implementación dunha arquitectura de software para localización, a cal ofrece varias vantaxes. En primeiro lugar, permite minimizar o número de restricci6ns multi-plataforma e multi-tecnoloxía á hora de acceder a distintos tipos de dispositivos hardware. En segundo lugar. facilítase a realización de tarefas comúns como a recolección e o almacenamento das medicións de sensores. Ademais, proporcinánse mecanismos para inserir e recuperar datos de localización ase como xestión de usuarios ou manipulación de múltiple" sistemas de mapas e coordenadas. Neste traballo presentamos varias solucións á hora de implementar arquitecturas de software para localización. comenzando por unha mono-tecnoloxía baseada unicarnente na recolección de niveis de sinal RSS, que evoluciona posteriormente a unha arquitectura multi-tecnoloxía. As solucións propostas ofrecen diferentes funcionalidades que resolven moitos dos problemas asociados aos sistemas híbridos RTLS, entre as que podemos destacar: • Multi-tecnoloxía. • Soporte de múltiples sistemas de coordenadas e de aplicacións de mapas. • Fusión de datos. • Protección e seguridad, tanto de datos como de acceso de usuarios. • API estandarizado para acceso remoto. • Soporte de consultas de datos off-line, non só on-line e en tempo real. • Facilidade de uso para os diferentes usuarios que utilicen a plataforma mediante chamadas a varios niveis: rexistro de WSNs, planos de edificios, rexistro de redes de áncoras e de nodos móviles, soporte de sensores xenéricos, inserción e consulta de medici6ns e de datos sensoriais en ero. inserción e consulta de posicións estimadas por algoritmos de localización, etc. Tamén contribuimos con múltiples implementacións da capa física de WSNs e experimentos. E grazas á colaboración con outros grupos de investigación de diferentes universidades puidemos, por unha parte, contribuir cunha solución de hardware e software para localización baseada en tecnoloxía RFID e, por outra parte, no deseño de novos modelos de antenas baseados en arrays lineais de ECPs, válidos para mellorar o rendemento das comunicacións en WSNs.[Resumen] El problema de la localización en el interior de edificios ha ido adquiriendo cada vez más importancia en los últimos años debido a la enorme demanda de nuevos servicios basados en localización (LBSs), que han ido apareciendo en la industria en sectores de todo tipo como eHeallb, marketing por proximidad, smart-parking y smart-cities, seguridad y emergeocias, logística o control industrial, entre otros. Estos sistemas habitualmeote se basan en la implementación de redes de sensores inalámbricos (WSN) capaces de transmitir o recibir señales de radio (RF) para localizar dispositivos móviles, generalmente adheridos a vehículos, personas o artimales. Mientras que en exteriores los sistemas satelitales basados en tecnologías como GPS funcionan correctamente en la mayoría de entornos, la localización en inleriores todavía plantea múltiples retos y no es una tarea sencilla de resolver. Principalmente aparecen problemas de propagación debido a los reflejos y rebotes de las sefiales en las estructuras de los edificios, pero también debido a atenuaciones y apantallamientos ocasionados generalmente por gente en movimiento. Para resolver estos problemas es necesario implementar Jas redes de sensores utilizando una o varias tecnologías inalámbricas (como pueden ser WiFí, ZigBee o Bluetooth), algunas de ellas disportibles en terminales inalámbricos como smartphones o tablets. Pero, por otra parte, también es necesario el uso de múltiples algoritmos y técnicas de localización, para filtrar y posiblemente combinar los datos de estas tecnologías, permitiendo obtener así sistemas de localización en tiempo real (RTLS) robustos y con la mayor precisión posible. De este modo, la aproximación más usual en la actualidad para resolver estos problemas es la implementación de sistemas de localización híbridos que soporten múltiples tecnologías simultáneamente. No obstante, el desarrollo de estos sistemas lleva implícito una gran complejidad. Una de las alternativas comúnmente aceptada es la implementación de una arquitectura de software para localización, que ofrece varias ventajas. En primer lugar, permite minimizar el número de restricciones multi-plataforma y multi-tecnología a la hora de acceder a distintos tipos de dispositivos hardware. En segundo lugar, se facilitan tareas comunes como la recolección y almacenamiento de las mediciones de los sensores. Además. se proveen mecanismos para insertar y recuperar datos de localización así como gestión de usuarios o manejo de múltiples sistemas de mapas y coordenadas. En este trabajo presentamos varias soluciones a la hora de implementar arquitecturas de software para localización, empezando por una mono-tecnología basada únicamente en la recoleccion de niveles de señal RSS, que se evoluciona posteriormente a una arquitectura mllltitecnología. Las soluciones propuestas ofrecen diferentes funcionalidades que resuelven muchos de los problemas asociados a los sistemas híbridos RTLS, entre las que podemos destacar: Multi-tecnología. Soporte de múltiples sistemas de coordenadas y de aplicaciones de mapas. • Fusión de datos. • Protección y seguridad, tanto de datos como de acceso de usuarios. • API estandarizado para acceso remoto. • Soporte de consultas de datos off-line, no solo on-line y en tiempo real. • Facilidad de uso para los diferentes usuarios que utilicen la plataforma, mediante llamadas a varios rtiveles: registro de WSNs, planos de edificios, registro de redes de anchors y de nodos móviles, soporte de sensores genéricos, inserción y consulta de mediciones y de datos sensoriales en crudo, inserción y consulta de posiciones estimadas por algoritmos de localización, etc. También contribuimos con múltiples implementaciones de la capa física de WSNs y experimentos. y gracias a la colaboración Con otros grupos de investigación de diferentes universidades hemos podido, por una parte, contribuir con una soluciÓn de hardware y software para localización basada en tecnología RFID y, por otra parte, en el diseño de nuevos modelos de antenas basados en arrays lineales de ECPs, válidos para mejorar el rendimiento de las comunicaciones en WSNs

Constelaciones Mayas: visualización e interpretación utilizando herramientas informáticas

There has been a long standing debate about the existence of maya constellations, but there are several sources of evidences that favour this hypothesis: mural paintings, stelae and codex. In this work, we have recovered and compiled information regarding mayan constellations and the mayan names for selected celestial bodies. We explain the process that was carried out to obtain all the information available and compile it under the same digital support. The result was incorporated into the Stellarium astronomical software to enrich the modules of archaeoastronomy and stellar legend, where constellations from diverse cultures are made available to users of the software by simulating their appearance in the night sky.Se ha debatido por mucho tiempo acerca de la existencia de constelaciones dentro de la cultura maya. Las evidencias que apoyan esta hipótesis provienen de diversas fuentes: pinturas en murales, estelas y códices, entre otros. En este trabajo, hemos recuperado y compilado información acerca de las constelaciones mayas y los nombres de algunos cuerpos astronómicos seleccionados. Se explica el proceso llevado a cabo para obtener dicha información y recopilarla en un soporte digital. El resultado fue incorporado en el programa de cómputo astronómico Stellarium, para enriquecer los módulos de arqueoastronomía y leyendas estelares, en donde se han puesto a disposición de los usuarios las constelaciones de diversas culturas, simulando su apariencia en el cielo nocturno

Influence of Strength Programs on the Injury Rate and Team Performance of a Professional Basketball Team: A Six-Season Follow-Up Study

This study aims to determine possible associations between strength parameters, injury rates, and performance outcomes over six seasons in professional basketball settings. Thirty-six male professional basketball players [mean +/- standard deviation (SD): age, 30.5 +/- 4.7 years; height, 199.5 +/- 9.5 cm; body mass, 97.9 +/- 12.9 kg; BMI 24.6 +/- 2.5 kg/m(2)] participated in this retrospective observational study, conducted from the 2008-09 to the 2013-14 season. According to their epidemiological records, each player followed an individual plan designed within different strength training programs: Functional (n = 16), Eccentric (n = 8), or Resistance (n = 12). Seven hundred and fourteen valid records were obtained from 170 individual strength tests during 31 sessions. Tests performed were leg press, squat, and jerk. Parameters recorded were force, power, velocity, peak velocity, and time to peak velocity for strength; time loss injury and muscle injury for injury rate; and games won, games lost, and championships for performance outcomes. All the strength variables and injuries are independent of the strength programs (p < 0.01). The correlation analysis showed very significant relationships between muscular injuries and time to peak velocity (r = 0.94; p < 0.01), significant relationships between force and games lost (r = 0.85; p < 0.05), and muscular injuries with games lost (r = -0.81; p < 0.05) per season. Mean values per season described a possible association of force, time to peak velocity, and muscular injuries with performance outcomes (R-2 = 0.96; p < 0.05). In this specific context, strength variables and injury rate data show no association with a single type of strength training program in this cohort of high-performance basketball players

Anticuerpos contra el virus del Oeste del Nilo en equinos de Antioquia y Meta, Colombia, 2005-2008

ABSTRACT: West Nile Virus (WNV) is an arthropod-borne agent classified in the Flavivirus genus. Infection has been demonstrated in many vertebrate species including birds, mammals and reptiles. WNV can affect the nervous system of humans, horses and birds causing mild to severe illness and sometimes death. In 1999 WNV was introduced into the Americas causing a small outbreak in New York City. In the following years, the virus spread across North America and later into Central America, the Caribbean and parts of South America. Serological evidence of WNV in Colombia was first documented in 2005 in equines from the Atlantic coast; however clinical cases in humans or animals have not been reported. We extended these studies searching for WNV antibodies in sera of equines of two other provinces in Colombia: Antioquia and El Meta. IgG and IgM antibodies were first determined and reactive sera were processed by plaque reduction neutralization test (PRNT) to confirm the specificity of results. Four horses from Antioquia but none from El Meta tested positive for WNV antibodies. These results suggest that WNV has spread across the Atlantic coast and is now invading the Andean region in Colombia.RESUMEN: El virus del Oeste del Nilo (WNV) es un agente del género Flavivirus transmitido por artrópodos. La infección con WNV ha sido demostrada en muchas especies de aves, mamíferos y reptiles. El WNV puede afectar el sistema nervioso de humanos, caballos y aves causando enfermedad de leve a severa, ocasionando la muerte en algunos casos. En 1999, el virus fue introducido en Norteamérica causando un brote en la ciudad de New York. En los siguientes años, el virus se extendió por Norteamérica, y posteriormente fue encontrado en el Caribe, Centro y Suramérica. El primer reporte de anticuerpos para WNV en Colombia se hizo en 2005, en equinos de la costa Atlántica. En el presente estudio se extendió la búsqueda de anticuerpos a otros dos Departamentos de Colombia: Antioquia y El Meta. Primero se determinó la presencia de anticuerpos IgM e IgG, y los sueros reactivos fueron procesados para anticuerpos neutralizantes por la técnica de reduccion de placas para confirmar los resultados. Cuatro equinos de Antioquia y ninguno de El Meta fueron positivos para anticuerpos anti-WNV. Los resultados sugieren que el WNV está ampliamente distribuido en la costa Atlántica de Colombia y ha iniciado su dispersión por la zona andina

In vitro establishment of Handroanthus heptaphyllus nodal segments

Micropropagation could be used as a viable alternative in the mass production of Handroanthus heptaphyllus (Vell.) Mattos (white lapacho). The objective of the present work was to establish in vitro of nodal segments of H. heptaphyllus. The nodal segments were taken from young plants kept in nurseries to which preventive treatments with fungicides were applied. The explants were disinfected with Sodium Hypochlorite (NaClO) which was tested at 5 or 10% for 5 min. Subsequently, it were placed in Murashige and Skoog culture medium. Live, contaminated or necrotic explants were quantified weekly until 35 days of culture. The results demonstrated the presence of microbial contaminants in the explants subjected to the two treatments. The incidence in the explants disinfected with 10% NaOCl did not exceed 45%, while with 5% it reached 70%. However, with the highest concentration there were losses of 35% due to necrosis of the explants and a survival of 20%. The use of nodal segments of young plants of white H. heptaphylus allows its in vitro establishment as a first step for the micropropagation of this species

Establecimiento in vitro de segmentos nodales de Handroanthus heptaphyllus de flores blancas

Micropropagation could be used as a viable alternative in the mass production of Handroanthus heptaphyllus (Vell.) Mattos (white lapacho). The objective of the present work was to establish in vitro of nodal segments of H. heptaphyllus. The nodal segments were taken from young plants kept in nurseries to which preventive treatments with fungicides were applied. The explants were disinfected with Sodium Hypochlorite (NaClO) which was tested at 5 or 10% for 5 min. Subsequently, it were placed in Murashige and Skoog culture medium. Live, contaminated or necrotic explants were quantified weekly until 35 days of culture. The results demonstrated the presence of microbial contaminants in the explants subjected to the two treatments. The incidence in the explants disinfected with 10% NaOCl did not exceed 45%, while with 5% it reached 70%. However, with the highest concentration there were losses of 35% due to necrosis of the explants and a survival of 20%. The use of nodal segments of young plants of white H. heptaphylus allows its in vitro establishment as a first step for the micropropagation of this species.La micropropagación podría ser utilizada como alternativa viable en la producción masiva de Handroanthus heptaphyllus (Vell.) Mattos (lapacho de flores blancas). El objetivo del presente trabajo fue establecer in vitro segmentos nodales de H. heptaphyllus. Los segmentos nodales fueron tomados de plantas jóvenes mantenidas en viveros a las cuales se les aplicaron tratamientos preventivos con fungicidas. Los explantes se desinfectaron con Hipoclorito de Sodio (NaClO) que se probó al 5 o al 10% durante 5 min. Posteriormente se colocaron en medio de cultivo Murashige y Skoog. Semanalmente hasta los 35 días de cultivo se cuantificaron los explantes vivos, contaminados o con necrosis. Los resultados demostraron la presencia de contaminantes microbianos en los explantes sometidos a los dos tratamientos. La incidencia en los explantes desinfectados con NaOCl al 10% no sobrepasó el 45% mientras que con 5% alcanzó 70%. Sin embargo, con la mayor concentración se produjeron pérdidas de 35% por necrosis de los explantes y una supervivencia de 20%. El uso se segmentos nodales de plantas jóvenes de H. heptaphylus de flores blancas permite su establecimiento in vitro como primer paso para la micropropagación de esta especie

Association of the ACTN3 rs1815739 Polymorphism with Physical Performance and Injury Incidence in Professional Women Football Players.

The p.R577X polymorphism (rs1815739) in the ACTN3 gene causes individuals with the XX genotype to be deficient in functional α-actinin-3. Previous investigations have found that XX athletes are more prone to suffer non-contact muscle injuries, in comparison with RR and RX athletes who produce a functional α-actinin-3 in their fast-twitch fibers. This investigation aimed to determine the influence of the ACTN3 R577X polymorphism on physical performance and injury incidence of players competing in the women’s Spanish first division of football (soccer). Using a cross-sectional experiment, football-specific performance and epidemiology of non-contact football-related injuries were recorded in a group of 191 professional football players. ACTN3 R577X genotype was obtained for each player using genomic DNA samples obtained through buccal swabs. A battery of physical tests, including a countermovement jump, a 20 m sprint test, the sit-and-reach test and ankle dorsiflexion, were performed during the preseason. Injury incidence and characteristics of non-contact injuries were obtained according to the International Olympic Committee (IOC) statement for one season. From the study sample, 28.3% of players had the RR genotype, 52.9% had the RX genotype, and 18.8% had the XX genotype. Differences among genotypes were identified with one-way analysis of variance (numerical variables) or chi-square tests (categorical variables). Jump height (p = 0.087), sprint time (p = 0.210), sit-and-reach distance (p = 0.361), and dorsiflexion in the right (p = 0.550) and left ankle (p = 0.992) were similar in RR, RX, and XX football players. A total of 356 non-contact injuries were recorded in 144 football players while the remaining 47 did not sustain any non-contact injuries during the season. Injury incidence was 10.4 ± 8.6, 8.2 ± 5.7, and 8.9 ± 5.3 injuries per/1000 h of football exposure, without differences among genotypes (p = 0.222). Injury rates during training (from 3.6 ± 3.7 to 4.8 ± 2.1 injuries per/1000 h of training exposure, p = 0.100) and match (from 47.8 ± 9.5 to 54.1 ± 6.3 injuries per/1000 h of match exposure, p = 0.209) were also similar in RR, RX, and XX football players. The ACTN3 genotype did not affect the mode of onset, the time needed to return to play, the type of injury, or the distribution of body locations of the injuries. In summary, women football players with different genotypes of the p.R577X ACTN3 polymorphism had similar values of football-specific performance and injury incidence. From a practical perspective, the ACTN3 genotyping may not be useful to predict performance or injury incidence in professional women football players.pre-print840 K

ANÁLISIS DE HABITABILIDAD EN CONJUNTOS RESIDENCIALES DE MEDIANA ALTURA CONSTRUIDOS EN CUENCA, ECUADOR

La expansión urbana es un fenómeno recurrente hoy en día en ciudades latinoamericanas intermedias. En Cuenca, Ecuador, la mayoría de los planes de vivienda de interés público que se construyen actualmente, se desarrollan en la periferia urbana, en conjuntos con viviendas unifamiliares adosadas, lo que contribuye al crecimiento desmedido de la ciudad. Los entes municipales promotores de estos proyectos aseguran que existe un rechazo de las personas a vivir en edificaciones de mediana altura, pese a que esto supondría varias ventajas relacionadas a un consumo de suelo menor. El presente estudio indaga sobre las condiciones de habitabilidad en conjuntos residenciales de mediana altura que se construyeron en la ciudad a finales del siglo XX, para establecer aquellas características de la habitabilidad que son más valoradas por los usuarios y que deberían ser tomadas en cuenta al momento de proyectar esta tipología de vivienda. La habitabilidad es medida a través de una encuesta que aborda aspectos físicos y psicosociales. Se utiliza la metodología Kansei-Kano para cuantificar datos cualitativos basados en la percepción. Los resultados obtenidos permiten determinar que temas como seguridad, calidad del espacio físico y presencia de estacionamientos son temas importantes para generar buenas condiciones de habitabilidad.Palabras clave: Expansión urbana, ciudades intermedias, kansei, kano, seguridad. AbstractUrban sprawl is a recurrent phenomenon in intermediate Latin American cities. In Cuenca, Ecuador, most of the public-interest housing projects that are currently being built consist of single-family attached houses located in perimetral areas, which undoubtedly contributes to the excessive growth of the city. Municipal entities that promote these projects assure that people refuse to live in mid-rise buildings, even though this would entail several advantages due to a lower consumption of land. This study investigates the habitability conditions in medium-rise residential complexes that were built at the end of the 20th century to establish the habitability aspects that the users value the most and should be considered in public-interest housing projects. Habitability is measured through a survey that addresses physical and psychosocial aspects; the Kansei-Kano methodology is used to quantify qualitative data based on the perceptions of those who currently live in mid-rise residential complexes. The results obtained allow us to draw conclusions such as the importance of security, space quality, and parking spaces in order to generate good habitability conditions. Keywords: Urban sprawl, intermediate cities, kansei, kano, security

Variación de bioaerosoles fúngicos en un quirófano en dos estaciones del año.

El objetivo del trabajo fue determinar la variación de los contenidos de bioaerosoles de un quirófano en dos estaciones del año.CONACYT - Consejo Nacional de Ciencias y TecnologíaPROCIENCI

Human Transmissible Spongiform Encephalopathy: Case Report

RESUMEN: Se presenta el caso de una mujer de 64 años con un cuadro clínico de ocho meses de duración, consistente en deterioro motor y cognitivo, que progresó rápidamente. Recibió tratamiento con quinacrina sin obtener beneficios y falleció en estado terminal, por choque séptico secundario a bronconeumonía por broncoaspiración. El cerebro fue donado para investigación y su estudio histopatológico reveló la presencia de lesiones espongiformes, astrogliosis y depósitos de proteína priónica (PrPRes) confirmados por Western blot. Todos estos rasgos se consideran característicos de la enfermedad por priones. Con este caso, no solo se informa sobre una enfermedad infrecuente en la casuística colombiana, sino que por primera vez en el país se usan simultáneamente la inmunohistoquímica y el Western blot como herramientas para el diagnóstico de estas enfermedadesSUMMARY: We report the case of a 64 year-old woman with motor and cognitive deterioration that progressed rapidly during eight months. She was unsuccessfully treated with quinacrine, and died in a terminal status, by septic shock secondary to bronchopneumonia by broncho-aspiration. The brain was donated for research and the histopathological analysis showed spongiform changes, astrogliosis and prion protein (PrPRes) deposits, confirmed by Western blot (WB). These features are considered characteristic of prion diseases, which are uncommon in Colombia. We highlight that its diagnosis was made for the first time in this country by the simultaneous use of immunohistochemistry and Western blo